隨著內(nèi)窺鏡的不斷進(jìn)步，對內(nèi)窺鏡圖像與組織圖像的關(guān)聯(lián)也進(jìn)行了大量的研究。但是，在內(nèi)窺鏡圖像和病理租織圖像的對比中，用系統(tǒng)的方法進(jìn)行對比的例子很少。我們將內(nèi)窺鏡圖像和病理組織圖像的一對一對應(yīng)法作為KOTO method進(jìn)行了報告，在本稿中解說了其詳細(xì)情況，對比的方法由以下3段組成。1)切出檢體時在水浸下拍攝整體照片以及利用體視顯微鏡的放大照片，2)通過重合組織像和整體像進(jìn)行病變部位的位置對準(zhǔn)，在此基礎(chǔ)上，將體視顯微鏡照片和組織像重合，用腺管單元進(jìn)行對應(yīng)。3)進(jìn)一步使體視顯微鏡照片和內(nèi)窺鏡照片相對應(yīng)，可以進(jìn)行組織像和內(nèi)窺鏡照片的對比。希望這種有條不紊的詳細(xì)對比將有助于內(nèi)窺鏡診斷的進(jìn)一步提高。

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隨著圖像增強(qiáng)內(nèi)窺鏡和放大內(nèi)窺鏡等內(nèi)窺鏡的進(jìn)行，內(nèi)窺鏡診斷得到了飛快的提高。顯示了VS classification和JNET分類2等的內(nèi)窺鏡部分，對內(nèi)窺鏡圖像和組織像的連接也進(jìn)行了很多研究。但是，進(jìn)行內(nèi)窺鏡圖像和病理組織像所采用的一對一的對比的例子很少。內(nèi)窺鏡像和組織像的一對一對應(yīng)在進(jìn)行高精度的內(nèi)窺鏡診斷上是很重要的，我們提出并報告了內(nèi)窺鏡像和病理組織像的系統(tǒng)的一對一對應(yīng)法作為KOTO method 3。這次，就該方法的詳細(xì)情況提出具體例子，并進(jìn)行解說。

II 對比方法

具體的對比方法分為以下3個階段進(jìn)行解說。

1) 福爾馬林固定后檢體的切出及攝影.

2) 立體顯微鏡照片和組織像的對比.

3) 按照內(nèi)窺鏡照片和體視顯微鏡照片、組織像的對比的順序進(jìn)行說明。

1)福爾馬林固定后檢體的切割及照片攝影

1.內(nèi)窺鏡切除檢體固定和攝影

使用10%中性福爾馬林，貼在軟木板等漂浮的板上，在粘膜面向下的狀態(tài)下固定。固定后整個樣本的照片在水浸數(shù)碼相機(jī)(D7500.Nikon.通過Tokyo，Japan)進(jìn)行攝影(Figure1)。由于水浸會使檢體表面的反射光消失，所以具有容易觀察表面結(jié)構(gòu)等的優(yōu)點，如果是比較小的檢體，在體視顯微鏡下拍攝“整體圖像的話，與大照片的對應(yīng)就會很小。

Figure2的照片是實體顯微鏡(SZX16.OLYMPUS.Tokyo.這是使用Japan)和顯微鏡用照相機(jī)(DP20.OLYMPUS)拍攝的整體圖像。

2、切割與染色

在標(biāo)本上間隔2-3毫米的距離，此時只對粘膜進(jìn)行割開，注意不對粘膜下層進(jìn)行切開（圖3）如果將標(biāo)本完全切開的話，各切片會產(chǎn)生偏差，因此表面會出現(xiàn)不好看的結(jié)構(gòu)，相反，如果分割過淺的話，在分離時也有不能切斷相同部位的情況，有必要充分切入粘膜深層。再次在水中浸泡粘膜狀態(tài)的標(biāo)本，拍攝整體照片以及病變中心區(qū)域的體視顯微鏡照片(Figure4).

在稀釋到0.5%左右的龍膽紫中浸泡數(shù)秒，立即水洗。通過龍膽紫染色，由于表面結(jié)構(gòu)變得清晰，所以體視顯微鏡像和內(nèi)鏡像的對應(yīng)以及體視顯微鏡像和圖像強(qiáng)調(diào)內(nèi)窺鏡像變得容易對應(yīng)。龍膽紫染色后的標(biāo)本：在水下拍攝整體照片，拍攝放大我們需要區(qū)域的體視顯微鏡照片(Figure5)。

我們在放大照片的拍攝中使用了體視顯微鏡，但是也可以用分辨率高的數(shù)碼相機(jī)等進(jìn)行拍攝來代替。3.進(jìn)行標(biāo)本的切割和標(biāo)本作照片拍攝后，將標(biāo)本的粘膜下屋進(jìn)行切割，制作標(biāo)本.將切出的標(biāo)本從斜向立體顯微鏡通過拍攝照片，也可以大體觀察從表面察覺到的血管深度(Figure6-a，b)。

標(biāo)本制作時，盡量形成筆直的形狀(與攝影時相同的形狀)。標(biāo)本處理需要注意。在制作病理標(biāo)本時，由于包埋時的類型決定了大小，所以長度超過的標(biāo)本在彎曲的狀態(tài)下需要進(jìn)行標(biāo)本制作。但是，在彎曲的標(biāo)本中，由于下述行程2)以下的對應(yīng)變得困難，所以需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/span>切割，努力制作筆直的書(切割時推薦用切割部位的切割的狀熊拍攝上述照片)。

2) 實體顯微鏡照片和組織像的對比

這次，實體顯微鏡照片和組織像的重疊，用Windows10的電腦進(jìn)行圖像處理軟件(Adobe Photoshop Elements15.Adobe Systems San Jose。組織照片為L(APERIO AT2.LeicaBiosystems，Nussloch.German)。在JPEGSL作為TIF文件保存L后，將一頁像和各部位的放大像保存((Aperio ImageScope.12.0.1.5027，Leica Biosystems，用于以下的對比。

1. 標(biāo)本整體像和組織像的重合

首先，將標(biāo)本的整體像和標(biāo)本的組織像的照片重合，進(jìn)行整體的位置對準(zhǔn)(Figure7)。

使用Photoshop按照下述1~5的順序進(jìn)行重合。①、在Photoshop中打開檢體的整體照片和組織標(biāo)本的標(biāo)簽像，在工科SPA一托一處使用左側(cè)的一圈自動選擇一勒，選擇標(biāo)本的背景(此時，將容許值設(shè)定為與標(biāo)本很好地從背景區(qū)別開來的情況。在這次的病例中，容許值為20)。

②點擊上菜單的選擇范圍內(nèi)的“選擇范圍項”，將標(biāo)本方定為選擇范圍。③選擇菜單放在一塊。④其次，切換為整體照片編輯，貼上組織的圖像。⑤在選擇像，將方形的彈跳框放在大、小組織像，標(biāo)本整體像的長度是擴(kuò)大、縮小，標(biāo)本的整體像的長度是四方的為了是組織像與之相配，旋轉(zhuǎn)使組織像與方向一致，將空隙移到UNING POCKS的外側(cè)，成為指示燈指向的方向的箭頭）和拖動使之旋轉(zhuǎn)的1個作品，因此切割標(biāo)本（比切片時切入數(shù)百um-1mm程度的部位成為實際標(biāo)本將所有的長度、標(biāo)記部分和樣品的寬度結(jié)合起來，推測實際的標(biāo)本制作部位

2、關(guān)注領(lǐng)域的平衡

接著，1）1.采用與①-⑤相同的方法將病變區(qū)域放大后的實體照片與組織的合稱《Figure 8-a，b.）一邊考慮整體的位置，一邊將標(biāo)記和標(biāo)本表面的合稱，尋找凹凸不平、腺管開口的部位。如果實體顯微鏡以及組織都可插入，則將尺寸大致對齊后再重合，或者尋找部位相交處會變得比較容易。但是，在本作過程中，也有脫水和石蠟切片伸展等過程，檢查由于標(biāo)本的比例尺寸不一定與切出時一致，所以根據(jù)需要用特殊的粘膜凹凸等進(jìn)行對應(yīng)并進(jìn)行修正。通過將色素染色前和染色后的照片重合，也可以同時得到表面結(jié)構(gòu)和血管的情況(Figure9)。在攝影的照片上擺放組織像。血管深度的一部分也變得容易(Figure10)。

3)內(nèi)窺鏡照片和體顯微鏡照片、組織像的對比

1.與內(nèi)窺鏡照片的對比標(biāo)志的位置和特殊的表面微結(jié)構(gòu)、血管等相對應(yīng).。將立體顯微鏡照片(Figure11-a，b)和內(nèi)窺鏡照片(Figure11-c，d)進(jìn)行比較。實體顯微鏡照片推定的實際的標(biāo)本對應(yīng)部位的內(nèi)窺鏡照片上粗照片左重對齊，使之對應(yīng)(Figure11-b，d.內(nèi)視鏡是與顯微鏡頭類似的圖像，特別是在邊緣部會產(chǎn)生變形，因此，從使其成對的實體顯微鏡照片中的腺管的位置費(fèi)系，進(jìn)行了實際的標(biāo)本作品。使制面和病變的范圍等相對應(yīng)。內(nèi)窺鏡照片是否可以在接近正面觀察的狀態(tài)下拍攝，另外，根據(jù)是否有特征性的構(gòu)造物，對比所需的勞力會發(fā)生很大的變化。在1)~3)中以組織為媒介的對比方法，如果在切割時進(jìn)行浸水下的照片拍攝的話，只用通常的病理診斷業(yè)務(wù)中使用的HE標(biāo)本就可以進(jìn)行對比。但是，關(guān)于標(biāo)本的切割復(fù)原圖部分，不得不從組織的形態(tài)來推測。因為沒有得到。這一點改良了，KOTO methodⅡ的對比方法！由岸本等人提出。

Ⅲ結(jié)語：

以內(nèi)窺鏡圖像和病理組像的系統(tǒng)的一對一對法為媒介，通過詳細(xì)的對比，將組織像的內(nèi)窺鏡圖像轉(zhuǎn)移到內(nèi)窺鏡圖像上，以組織學(xué)的根據(jù)為基礎(chǔ)的內(nèi)窺鏡診斷有望得到進(jìn)一步的發(fā)展。